Nová súprava na detekciu nukleových kyselín koronavírusu (SARS-Cov-2).
New Coronavirus(SARS-Cov-2) Nucleic Acid Detection Kit
(Flurudascent RT-PCR Probe Method) Product Manual
【Product name 】Nová súprava na detekciu nukleových kyselín koronavírusu (SARS-Cov-2) (metóda fluorescenčnej RT-PCR sondy)
【Packaging specifications 】25 testov/súprava
【Intended usveku】
Táto súprava sa používa na kvalitatívnu detekciu nukleovej kyseliny z nového koronavírusu vo výteroch z nosohltanu, orofaryngeálnych (krčných) výteroch, predných výteroch z nosa, výteroch zo strednej časti muštičiek, výplachoch nosa a aspirátoch z nosa od osôb, u ktorých je ich poskytovateľ zdravotnej starostlivosti podozrivý z COVID19. Detekciu génov ORF1ab a N nového koronavírusu možno využiť na pomocnú diagnostiku a epidemiologické monitorovanie novej infekcie koronavírusom.
【Principles of the prokudure 】
Táto súprava je navrhnutá pre špecifické TaqMan sondy a špecifické priméry navrhnuté pre nové koronavírusové (SARS-Cov-2) ORF1ab a N génové sekvencie. Reakčný roztok PCR obsahuje 3 sady špecifických primérov a fluorescenčných sond na špecifickú detekciu cieľov a dodatočná sada špecifických primérov a fluorescenčných sond sa používa ako vnútorná štandardná kontrola súpravy na detekciu endogénnych prevádzkových génov.
Princíp testu spočíva v tom, že špecifická fluorescenčná sonda je štiepená a degradovaná exonukleázovou aktivitou enzýmu Taq v PCR reakcii, takže reportérová fluorescenčná skupina a zhášaná fluorescenčná skupina sú oddelené, takže systém monitorovania fluorescencie môže prijímať fluorescenčné Prostredníctvom obohateného účinku PCR amplifikácie dosiahne fluorescenčný signál sondy nastavenú prahovú hodnotu - hodnotu Ct (prah cyklu). V prípade, že nie je žiadny cieľový amplikón, reportérová skupina sondy je blízko zhášacej skupiny. V tomto čase nastáva prenos fluorescenčnej rezonančnej energie a fluorescencia reportérovej skupiny je zhášaná zhášacou skupinou, takže fluorescenčný signál nemôže byť detekovaný fluorescenčným PCR prístrojom.
Na monitorovanie použitia činidiel počas testu je súprava vybavená pozitívnymi a negatívnymi kontrolami: pozitívna kontrola obsahuje cieľový rekombinantný plazmid a negatívna kontrola je destilovaná voda, ktorá sa používa na monitorovanie znečistenia životného prostredia. Pri testovaní sa odporúča nastaviť pozitívnu a negatívnu kontrolu súčasne.
【Main components 】
| Cat. No. | BST-SARS-25 | BST-SARS-DR-25 | Componentov | |
| Náme | Špeczisťovanie | Kvantity | Kvantity | |
| Pozitívna kontrola | 180 ul/fľaštička | 1 | 1 | Umelo skonštruované plazmidy, destilovaná voda |
| Negatívna kontrola | 180 ul/fľaštička | 1 | 1 | Destilovaná voda |
| Zmes SARS-Cov-2 | 358,5 μl/fľaštička | 1 | / | Špecifické páry primérov, špecifické detekčné fluorescenčné sondy, dNTP, MgCl2, KCl, Tris-Hcl, destilovaná voda atď. |
| Enzýmová zmes | 16,5 μl/fľaštička | 1 | / | Enzýmy Taq, reverzná transkriptáza, enzýmy UNG atď. |
| Zmes SARS-Cov-2 (lyofilizovaná) | 25 testov/fľaštička | / | 1 | Špecifické páry primérov, špecifické detekčné fluorescenčné sondy, dNTP, Taq enzýmy, reverzná transkriptáza, destilovaná voda atď. |
| 2x vyrovnávacia pamäť | 375 ul/fľaštička | / | 1 | MgCl2, KCl, Tris-Hcl, destilovaná voda atď. |
Poznámka：(1) Komponenty v rôznych dávkových súpravách nemožno miešať ani zamieňať.
(2) Pripravte si vlastné činidlo: Súprava na extrakciu nukleových kyselín.
【Storage conditions a expiration date 】
For BST-SARS-25:Prepravujte a skladujte pri teplote -20±5 ℃ na dlhú dobu.
For BST-SARS-DR-25:Prepravujte pri izbovej teplote. Skladujte pri teplote -20±5 °C po dlhú dobu.
Vyhnite sa opakovaným cyklom zmrazovania a rozmrazovania. Doba platnosti je predbežne stanovená na 12 mesiacov.
Dátum výroby a použitia nájdete na štítku.
Po prvom otvorení možno činidlo skladovať pri teplote -20±5 °C nie dlhšie ako 1 mesiac alebo do konca obdobia činidla, podľa toho, ktorý dátum nastane skôr, aby sa predišlo opakovaným cyklom zmrazovania a rozmrazovania a počtu zmrazovaní činidla. - cykly rozmrazovania by nemali presiahnuť 6-krát.
【Applicable instrument】ABI 7500, SLAN-96P, Roche-LightCycler-480.
【Sample requirements 】
1. Použiteľný typ vzorky: Extrahovaný roztok nukleovej kyseliny.
2. Skladovanie a preprava vzorky: Skladujte pri -20±5 °C po dobu 6 mesiacov. Vzorky zmrazte a rozmrazte maximálne 6-krát.
【Todhading method】
1.Nucleic acid extraction
Vyberte vhodnú súpravu na extrakciu nukleovej kyseliny na extrakciu vírusovej nukleovej kyseliny a postupujte podľa príslušných pokynov súpravy. Odporúča sa použiť súpravu na extrakciu a čistenie nukleových kyselín vyrábanú spoločnosťou Yixin Bio-Tech (Guangzhou) Co., Ltd. alebo ekvivalentnú súpravu na čistenie nukleových kyselín.
2. Reaction reagent preparation
2.1 For BST-SARS-25:
(1) Odstráňte zmes SARS-Cov-2 a zmes enzýmov, úplne roztopte pri izbovej teplote, dôkladne premiešajte pomocou zariadenia Vortex a potom krátko odstreďte.
(2) 16,5 ul zmesi enzýmov sa pridalo k 358,5 ul zmesi SARS-Cov-2 a dôkladne sa premiešalo, aby sa získal zmiešaný reakčný roztok.
(3) Pripravte si čistú 0,2 ml PCR oktálovú skúmavku a označte ju 15 ul vyššie uvedeného zmiešaného reakčného roztoku na jamku.
(4) Pridajte 15 μl purifikovaného roztoku nukleovej kyseliny, pozitívnu kontrolu a negatívnu kontrolu a opatrne zakryte uzáver oktálovej skúmavky.
(5) Dobre premiešajte prevrátením hore dnom a rýchlo odstreďte, aby sa kvapalina skoncentrovala na dne skúmavky.
1
2.2 For BST-SARS-DR-25:
(1) Pridajte 375 ul 2x tlmivého roztoku do zmesi SARS-Cov-2 ((lyofilizovaný) na prípravu reakčnej zmesi. Dôkladne premiešajte pipetovaním a potom krátko odstreďte. （Po príprave reakčnej zmesi sa odporúča skladovať pri teplote -20 °C dlhodobé skladovanie).
(2) Pripravte si čistú 0,2 ml PCR oktálovú skúmavku a označte ju 15 μl reakčnej zmesi na jamku.
(3) Pridajte 15 μl purifikovaného roztoku nukleovej kyseliny, pozitívnu kontrolu a negatívnu kontrolu a opatrne zakryte uzáver oktálovej skúmavky.
(4) Dobre premiešajte prevrátením hore dnom a rýchlo odstreďte, aby sa kvapalina skoncentrovala na dne skúmavky.
3. PCR amplification (Prevádzkové nastavenia nájdete v príručke k prístroju.)
3. 1 Umiestnite 8-skúmavku PCR do komory na vzorky fluorescenčného prístroja PCR a nastavte testovanú vzorku, pozitívnu kontrolu a negatívnu kontrolu podľa poradia plnenia.
3.2 Fluorescenčný detekčný kanál:
(1) Gén ORF1ab vyberá detekčný kanál FAM (Reportér: FAM, Quencher: Žiadny).
(2) N gén vyberá detekčný kanál VIC (Reportér: VIC, Quencher: Žiadny).
(3) Gén vnútorného štandardu vyberá detekčný kanál CY5 (Reportér: CY5, zhášač: Žiadny).
(4) Pasívna referencia je nastavená na ROX.
3.3 Nastavenie parametrov programu PCR:
| Krok | Teplota (℃) | Čas | Počet cyklov | |
| 1 | Reverzná transkripčná reakcia | 50 | 15 min | 1 |
| 2 | Aktivácia enzýmu Taq | 95 | 2,5 min | 1 |
| 3 | Aktivácia enzýmu Taq | 93 | 10 s | 43 |
| Predĺženie žíhania a získanie fluorescencie | 55 | 30 s | ||
Po nastavení uložte súbor a spustite reakčný program..
4.Results analysis
Po skončení programu sa výsledky automaticky uložia a analyzuje sa krivka amplifikácie. Krivka amplifikácie je nastavená na predvolený prah prístroja.
【Explanation of test results 】
1. Určite platnosť experimentu: Pozitívna kontrola FAM, kanál VIC by mala mať typickú amplifikačnú krivku a hodnota Ct je vo všeobecnosti menšia ako 34, ale môže kolísať v dôsledku rôznych nastavení prahov rôznych prístrojov. Negatívny kontrolný kanál FAM, VIC by mal byť neamplifikované Ct. Je dohodnuté, že vyššie uvedené požiadavky musia byť splnené súčasne, inak je tento test neplatný.
2. Výsledok rozsudku
| kanál FAM/VIC | Výsledok rozsudku |
| Ct＜37 | Vzorový test je pozitívny |
| 37≤Ct＜40 | Amplifikačná krivka má tvar S a podozrivé vzorky je potrebné znovu preskúmať; ak sú výsledky opätovného vyšetrenia konzistentné, hodnotí sa pozitívne, inak je negatívne |
| Ct≥40 alebo bez zosilnenia | Test vzorky je negatívny (alebo pod dolnou hranicou detekcie súpravy) |
Poznámka: (1) Ak sú kanál FAM aj kanál VIC súčasne kladné, SARS-Cov-2 sa považuje za kladný.
(2) Ak je kanál FAM alebo kanál VIC pozitívny a druhý kanál je negatívny, test by sa mal zopakovať. Ak je zároveň pozitívny, bude hodnotený ako SARS-Cov-2 pozitívny, v opačnom prípade bude vyhodnotený ako SARS-Cov-2 negatívny.
Súvisiace produkty
-
Súprava na detekciu protilátok COVID-19 IgM/IgG
Súprava na detekciu protilátok COVID-19 IgM/IgG (metóda imunochromatografie na koloidné zlato) Príručka k produktu 【NÁZOV PRODUKTU】 Súprava na detekciu protilátok COVID-19 IgM/IgG (metóda imunochromatografie na koloidné zlato) 【BALENIE【ŠPECIFIKÁCIA TESTOV/BALENIA】1 ŠPECIFIKÁCIA BALENIA】 ABSTRAKT】 Nové koronavírusy patria do rodu β. COVID-19 je akútne respiračné infekčné ochorenie. Ľudia sú vo všeobecnosti náchylní. V súčasnosti sú pacienti infikovaní novým koronavírusom hlavným zdrojom...
-
Súprava na extrakciu alebo čistenie nukleových kyselín
Súprava na extrakciu alebo purifikáciu nukleových kyselín alebo skladovaná pri -20 °C. Vzorka by sa mala prepravovať pomocou zvlnenia pri 0 °C. Úvod Súprava na extrakciu alebo purifikáciu nukleových kyselín (metóda magnetických guľôčok) je navrhnutá na automatickú purifikáciu RNA a DNA z telesných tekutín (ako sú výtery, plazma, sérum) pomocou automatických nástrojov na extrakciu nukleových kyselín. Technológia magnetických častíc poskytuje vysokokvalitnú DNA/RNA, ktorá je vhodná pre ...
-
Súprava SARS-CoV-2 Antigen Assay Kit （Imunochromatogr...
SARS-CoV-2 Antigen Assay Kit (Imunochromatografická metóda) Manuál k produktu 【NÁZOV PRODUKTU】SARS-CoV-2 Antigen Assay Kit (Imunochromatografická metóda) 【ŠPECIFIKÁCIE BALENIA】 1 Test/súprava 〲Kolektív genuβά】 k románu COVID-19 je akútne respiračné infekčné ochorenie. Ľudia sú vo všeobecnosti náchylní. V súčasnosti sú pacienti infikovaní novým koronavírusom hlavnými...
-
Súprava na stanovenie antigénu SARS-CoV-2
Antigénová súprava SARS-CoV-2 (Imunochromatografická metóda) Príručka k produktu 【NÁZOV PRODUKTU】Súprava antigénu SARS-CoV-2 (Imunochromatografická metóda) 【ŠPECIFIKÁCIE BALENIA】 1 test/súprava】 25 testov/súprava AB10CT, sada nové koronavírusy patria do rodu β. COVID-19 je akútne respiračné infekčné ochorenie. Ľudia sú vo všeobecnosti náchylní. V súčasnosti sú hlavným zdrojom infekcie pacienti infikovaní novým koronavírusom; asymptomaticky infikovaní ľudia...